**篇 总论
第二章 老年医学研究方法
2.分子生物学方法在老年医学研究中的应用
1)蛋白质组学技术平台:①双相电泳:由O’Farrell于1975年建立的双相聚丙烯酰胺凝胶电泳(tWO-一dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2一D PAGE)分离蛋白质技术仍是目前获得蛋白质图���的主要手段。②质谱(mass spectrometry,MS)鉴定:质谱分析作为蛋白质的鉴定技术确定蛋白质序列的重要工具,广泛用于蛋白质组的研究中。③蛋白质组数据库(proteomic:database):通过质谱技术获得的一些特征性的参数,如蛋白质的多个肽段的质量数据与已知序列蛋白质数据库中的蛋白质肽段质量比较其相关性,从而推出待测序列。目前有很多蛋白质数据库可以在互联网上获得。④其他蛋白质组研究相关技术:如多维液相色谱、毛细管电泳、双相液相电泳等技术。虽然它们分离蛋白质的能力不如双相电泳,但它们具有能在液相分离、保持原蛋白质活性及结构、可大量制备样品等优点。此外,还有蛋白质芯片技术,它可直接将血清或其他组织提取物加于芯片上高通量快速地进行筛选蛋白质。其原理是利用蛋白质芯片从待测样品中亲和吸附、分离特定蛋白质,随后以表面增强激光解吸/电离技术:(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)进行鉴定,可高速地进行活性蛋白质组分析。如I)ayal用蛋白质芯片技术确定载脂蛋白性质及其定量分析,仅用血浆样本即可鉴定载脂蛋白A-I(ApoA I)和载脂蛋白A-Ⅱ(ApoAⅡ)表达水平及其糖基化产物。
2)蛋白质组学技术在心血管疾病研究中的应用:近些年来,蛋白质组学技术在心血管病领域的研究主要围绕着心肌细胞线粒体功能、应激、心肌缺血预适应、冠心病、心肌病、血管改变机制等,其应用与进展归纳起来主要有:①扩张型心肌病的蛋白质组研究:基因表达异常在扩张型心肌病的发病机制中可能起了很大作用。Joseph等获取扩张型心肌病死亡患者的心脏组织作为标本,发现88种蛋白质含量较正常对照减少,这些蛋白质的减少可能与扩张型心肌病的蛋白酶活性的变化相关。研究发现表达减少的蛋白质包括肌球蛋白轻链2(myosin light chain,MLC2)、肌间线蛋白、ATP合成酶、肌酸激酶、热休克蛋白60(heatshock protein,HSP60)和热休克蛋白70(HSP70)。
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