《生物化学实验(第二版)》在**版的基础上,根据应用中发现的问题及生物化学实验的进展做了修改。全书分为四部分,包括44个实验。基础性实验部分重在基本实验技能的培训;综合性实验部分着重实验原理的应用和提高分析能力。这两部分涵盖了与生物化学理论相适应的生物化学实验内容和技术,包括糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素的分离、纯化、定性或定量分析,功能和代谢的研究等。设计性实验部分在前两部分的基础上为学生提供一个独立实验的空间,着重培养学生的独立科研能力。附录介绍了生物化学实验室规则、实验报告书写、常用实验室操作规范、试剂的配制和一些生物化学常用数据。
《生物化学实验(第二版)》可作为普通高等师范院校及非师范院校本、专科生命科学各专业及农学、食品各专业的生物化学实验教材,也可作为中学生物教师的参考用书。 生物化学实验-(第二版)_王林嵩张丽霞仉晓文马克世王丽_科学出版社_

**部分 基础性实验
实验1 纸层析法分离氨基酸
【实验目的】
掌握分配层析的原理;学习氨基酸纸层析法的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量);学习未知样品的氨基酸成分分析的方法(水解、层析及鉴定)。
【实验原理】
层析法又叫色层分离法、色谱分析法或色谱法。1903年俄国化学家茨维特(M.Tswett)将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱,并继续以石油醚淋洗,由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,色素被逐渐分离,在管柱中出现了不同颜色的谱带或称色谱(chromatogram),因此称为色层分离法。1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体,显示了这一分离技术的高度分辨力,从此引起了人们的广泛注意。自1944年应用滤纸作为固定支持物的“纸层析”诞生以来,层析技术的发展越来越快,20世纪50年代开始,相继出现了气相色谱和**液相层析,其他如薄层层析、亲和层析、凝胶层析等也迅猛发展。层析分离技术操作简便,样品用量可大可小,既可用于实验室分离分析,又适用于工业生产中产品的分析制备。层析法的*大特点是分离效率高,它能分离各种不同性质及类似的物质,而且既可以用于少量物质的分析鉴定,又可用于大量物质的分离纯化制备。现已成为生物化学、分子生物学、生物工程等学科广泛应用而又必不可少的分析工具之一。
根据固定相基质的形式分类,层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。纸层析是指以滤纸作为基质的层析。薄层层析是将基质在玻璃、塑料或金属板等光滑表面辅成一薄层,在薄层上进行层析。柱层析则是指将基质填装在管中形成柱形,在柱中进行层析。
根据流动相的形式分类,层析可以分为气相层析和液相层析。气相层析是指流动相为气体的层析,而液相层析是指流动相为液体的层析。
根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
纸层析所依据的原理是分配层析,故属于分配层析的范畴。
(一)分配层析
分配层析法是利用不同的物质在两个相混而互不相溶的溶剂中的分配情况不同而使之得到分离的方法。将分配层析法中的一种溶剂设法固定起来,再用另外一种溶剂来��洗这个固定溶剂,同样可达到将不同物质分离的目的。把固定起来的溶剂称为固定相,把用作冲洗的溶剂叫做流动相。为了

第二版前言
**版前言
**部分 基础性实验
实验1 纸层析法分离氨基酸
实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白
实验3 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量
实验4 酶的专一性
实验5 酶反应动力学的影响因素
实验6 RNA定量测定
实验7 DNA定量测定(二苯胺法)
实验8 紫外吸收法测定核酸含量
实验9 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验10 肝糖原的提取和鉴定
实验11 卵磷脂的提取和鉴定
实验12 油脂酸价的测定
实验13 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
实验14 血清谷丙转氨酶活力测定
第二部分 综合性实验
实验15 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量
实验16 蛋白质印迹
实验17 疏水层析分离纯化α-淀粉酶
实验18 小麦幼苗淀粉酶活性的测定
实验19 正交法测定影响淀粉酶活力的几种因素
实验20 植物组织中过氧化物酶活力的测定
实验21 乳酸脱氢酶活力测定
实验22 酵母蔗糖酶的粗分离
实验23 离子交换柱层析纯化蔗糖酶
实验24 蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定
实验25 反应时间对产物形成的影响
实验26 小麦叶片淀粉酶Vmax和Km测定
实验27 底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定
实验28 小麦叶片淀粉酶**剂动力学反应
实验29 质粒DNA的提取、酶切和鉴定
实验30 大肠杆菌感受态细胞的制备
实验31 小牛胸腺DNA的制备
实验32 小牛胸腺DNA熔解温度的测量
实验33 植物基因组提取(CTAB法)
实验34 萝卜过氧化物酶基因rsprx1的扩增
实验35 实时荧光定量PCR
实验36 酵母RNA的提取与组分鉴定
实验37 粗脂肪的定量测定
实验38 丙二醛的测定
实验39 发酵过程中无机磷的利用和ATP的生成(ATP的生物合成)
第三部分 设计性实验
实验40 蛋白质的沉淀反应和等电点测定
实验41 目的基因的扩增与鉴定
实验42 影响肝糖原含量的因素
实验43 酶反应*适条件的选择
实验44 植物过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳
主要参考文献
附录
一、实验室规则
二、实验报告书写
三、常用实验室操作规范
四、试剂的配制