《生物分子实验教材(第3版)》结构严谨,内容新颖,注重理论阐述与实践操作的结合、艺术创意与表现技法的结合,有较强的科学性、实用性和操作性。主要内容有实验项目、实验室常规技术和仪器使用、专题介绍等。 生物分子实验教材_翟朝阳,杨鲁川_四川大学出版社_

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7.将皮肤小块按适当间隔放置在涂有大鼠鼠尾胶原(见附录)的25mL无菌培养瓶内,使其固定。然后翻转培养瓶,使有皮肤小块的一面向上。
8.加入1.5mL含20%小牛血清的McCoys—**培养液。注意勿使培养液与组织块接触,塞紧瓶塞。
9.让有皮肤小块的一面向上,将培养瓶放入37℃温箱,静置3h~4h后,轻轻将培养瓶翻转过来,使培养液与组织块接触,切勿晃动。3d~4d内不要观察和翻动,以免影响组织块的贴壁及生长。
10.约1周后每天换液1次。
11.细胞生长的观察。
组织块接种后4d~7d开始长出细胞,有些组织块长出成纤维细胞,有些组织块长出上皮细胞。上皮细胞一般会在1个月左右自行退化,然后再长出成纤维细胞。当成纤维细胞长成若干大片时,密集的细胞成为集落,或是当成纤维细胞铺满瓶底(即完全汇合)时,便可进行传代。
传代时将瓶内的培养液弃去,用PBS洗1次,加入胰蛋白酶—EDTA消化液0.5mL,轻轻摇动,使整个瓶底湿润,置37℃温箱内消化3min~5min。加入新鲜配制的上述培养液3mL,用滴管把细胞从瓶壁上轻轻地吹打下来,使其成细胞悬浮液,稍静止以后使组织块沉至瓶底。根据细胞的数量,将细胞悬浮液分别转种到新的培养瓶内,25mL的培养瓶大约接种25万个细胞。留在瓶底的组织块便可弃去。从细胞开始生长到第1次传代,大约要经历1~2个月。以后视细胞生长的快慢,大约7d~10d传代1次,3d~4d换液1次。
(注意事项)
1.由于通过外科手术获取的皮肤标本带有脂肪,在操作过程中使用的器皿上也都涂有一层脂肪油滴,若未将这些油滴洗干净,就会污染培养液及培养瓶,使组织难以贴瓶,即使贴瓶也很少生长。因此,必须用PBS或Hanks液将油滴彻底洗净。
2.要尽可能地剪去皮下结缔组织,因为结缔组织不易长出细胞。组织碎块上带的结缔组织多了,就会包绕组织块的切面,使组织块的切面不能直接贴附于瓶壁,影响细胞的生长。
3.在接种组织块时,要将组织块的切面贴在瓶底上,这样,有活力的细胞层才能很快长出细胞。
4.进行外科手术或是活体组织检查皮肤时,若用碘酊消毒,要用PBS或Hanks液洗净,尽可能除去碘,因碘对细胞有毒性,使细胞不易生长。
5.组织块接种后,避免经常翻动和振动,否则组织块不易附着在瓶壁上,或是附着后又会脱落。培养液也不宜过多,不然浸泡的组织块受液体轻微的波动便会脱落下来。
6.皮肤细胞培养一般能传30~60代,在此期间,可按实验的要求选择不同代的细胞进行各种细胞生物学分析乃至突变、转化、癌变等研究。

实验项目
实验1凝集反应
实验2沉淀反应
实验3免疫扩散和免疫电泳
实验4补体结合实验
实验5溶血实验
实验6E玫瑰花环实验
实验7酶联免疫吸附实验
实验8猪脾（肝）脏细胞染色体DNA的提取与测定
实验9植物染色体DNA的提取
实验10细菌染色体DNA的提取
实验11动物组织细胞总RNA的提取
实验12酵母RNA的提取与测定
实验13定磷法测定核酸浓度
实验14质粒DNA的提取
实验15随机引物PCR测定细菌染色体DNA基因型
实验16核酸（DNA）电泳
实验17DNA的限制性核酸内切酶酶切分析
实验18DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验19从凝胶中回收目的DNA片段
实验20质粒DNA与目的DNA片段的连接
实验21重组质粒DNA转化原核细胞
实验22大肠埃希氏菌感受态细胞的制备及转化
实验23重组克隆筛选
实验24蛋白质的沉淀和变性反应
实验25血清蛋白乙酸纤维素膜电泳
实验26琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白
实验27聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
实验28染色法测定蛋白质浓度
实验29Folon-酚法测定蛋白质浓度
实验30紫外吸收法测定蛋白质浓度
实验31SDS—PAGE测定蛋白质相对分子质量
实验32超氧化物歧化酶的分离和纯化
实验33超氧化物歧化酶活性染色鉴定法
实验34血清高密度脂蛋白—胆固醇和总胆固醇的测定
实验35去污剂及膜活性试剂对红细胞细胞膜的作用
实验36滴定法测定维生素C的含量
实验37细胞色素C的制备
实验38细胞色素C含铁量的测定
实验39碱性磷酸酶的分离、纯化和动力学
实验40肝糖原的提取与鉴定
实验41尿糖定性实验
实验42金免疫技术
实验43胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
实验44兔肝细胞脱氧核糖核酸的提取
实验45原代及传代细胞培养
实验46培养细胞的冻存和复苏
实验47人皮肤成纤维细胞的培养
实验室常规技术和仪器使用
离心技术
分光光度计技术
电泳技术
层析技术
细胞培养技术
常用玻璃仪器及其洗涤方法
试剂的配制
缓冲溶液
常规仪器设备及其使用
实验报告和实验室守则
实验报告的撰写
实验室守则
专题介绍
单克隆抗体制备技术
酶免疫组化染色技术
荧光免疫组化技术
DNA序列分析