本书**版出版以来，受到读者的欢迎。在**版面世的五年多时间里，随着生命科学研究的深入，又衍生出了一些新的方法。第二版旨在及时地把这些方法介绍给读者。本版新增的内容较多，主要包括： 详细地介绍了芯片PCR、电子PCR和数字PCR及其应用； 增加和丰富了PCR在各领域中的应用； 对一些重要的PCR方法，诸如致突变PCR、免疫PCR、实时荧光定量PCR和PCR在法医学中的应用等章节进行补充更新。
本书是一本关于PCR技术的实验手册，适用与所有从事生命科学研究的科技工作者、教师和研究生阅读参考。

**章 绪论1
**节 PCR发展简史1
第二节 PCR技术的基本原理和操作2
一、PCR的基本原理2
二、PCR的基本成分2
三、PCR的基本操作3
第三节 PCR的主要应用4
一、基础研究方面的应用4
二、临床上的应用5
三、法医学中的应用6
四、其它方面的研究6
本章参考文献7

第二章 扩增已知序列两侧DNA的PCR8
**节 反向PCR8
一、引言8
二、基本原理8
三、材料8
四、方法9
五、注意事项10
六、应用11
七、小结13
参考文献13
第二节 锚定PCR13
一、引言13
二、原理14
三、用连接锚定PCR从基因文库中扩增已知基因侧翼序列15
四、用互补锚定PCR直接扩增已知序列侧翼cDNA序列16
五、问题及对策19
六、小结20
参考文献21
第三节 RACEcDNA末端的快速扩增21
一、引言21
二、RACE基本原理22
三、实验方案23
四、RACE的应用26
五、小结26
参考文献26
第四节 连接介导的PCR27
一、引言27
二、原理27
三、材料27
四、操作步骤28
五、注意事项30
六、应用31
七、小结33
参考文献33
第五节 BubblePCR34
一、引言34
二、原理34
三、材料与方法35
四、注意事项36
五、应用36
六、小结37
参考文献37

第三章 巢式PCR38
**节 常规巢式PCR38
一、引言38
二、原理38
三、材料38
四、方法39
五、注意事项39
六、应用与小结39
参考文献40
第二节 半巢式PCR40
一、引言40
二、材料40
三、方法40
四、注意事项41
五、应用与小结41
参考文献41
第三节 反转录巢式PCR41
一、引言41
二、材料41
三、方法42
四、注意事项43
五、应用43
参考文献43
第四节 共有序列巢式PCR43
一、引言43
二、材料43
三、方法44
四、注意事项44
五、应用与小结44
参考文献45
第五节 种特异巢式PCR45
一、引言45
二、材料45
三、方法45
四、注意事项46
五、应用与小结46
参考文献47
第六节 巢式PCR变性梯度凝胶电泳47
一、引言47
二、材料47
三、方法47
四、注意事项48
五、应用与小结49
参考文献49
第七节 巢式PCR限制性片段长度多态性49
一、引言49
二、材料49
三、方法50
四、注意事项51
五、应用与小结51
参考文献51

第四章 实时荧光定量PCR52
**节 实时荧光定量PCR原理52
一、引言52
二、概念及原理52
第二节 实时荧光定量PCR中的荧光化学物质54
一、引言54
二、荧光染料54
三、水解探针54
四、分子信标55
五、双杂交探针56
六、复合探针57
第三节 实时荧光定量PCR的定量方法57
一、**定量57
二、相对定量58
第四节 实时荧光定量PCR的实验方法60
一、实时定量PCR61
二、实时定量RTPCR63
三、实验方案的优化65
四、实践中应该注意的问题67
第五节 实时荧光定量PCR技术的应用68
一、在病原体检测中的应用68
二、在**研究中的应用69
三、在基因表达研究中的应用70
四、在细胞因子表达分析中的应用70
五、在遗传学及SNP分析上的应用71
本章小结71
本章参考文献72

第五章 致突变PCR74
**节 随机错误掺入PCR构建突变体库74
一、引言74
二、原理75
三、材料与方法75
四、注意事项75
五、讨论76
六、应用76
第二节 PCR构建定点突变序列或重组序列77
一、引言77
二、实验方案77
方案1重叠延伸PCR77
方案2大引物PCR79
方案3重组PCR80
方案4环状质粒PCR82
三、注意事项84
四、讨论84
五、应用85
六、小结86
本章参考文献86

第六章 测序和DNA合成PCR87
**节 不对称PCR87
一、引言87
二、引物浓度不对称PCR87
三、热（引物长度）不对称PCR89
四、应用92
五、小结93
参考文献93
第二节 PCR测序法94
一、直接测序法94
二、循环测序法95
三、全自动DNA测序法96
四、应用97
参考文献97
第三节 乳化液PCR97
一、引言97
二、原理97
三、材料和方法98
四、应用105
五、小结105
参考文献105
第四节 基于PCR的大片段DNA的合成106
一、引言106
二、基本原理106
三、目的序列、寡核苷酸和测序引物的设计106
四、操作步骤108
五、DNA合成时常出现的问题及解决办法111
六、小结112
参考文献112

第七章 免疫PCR114
**节 immunoPCR114
一、引言114
二、基本原理114
三、材料和试剂116
四、方法116
五、注意事项121
六、应用121
七、小结122
参考文献122
第二节 免疫捕捉PCR123
一、引言123
二、基本原理124
三、材料124
四、方法124
五、注意事项126
六、应用127
七、小结128
参考文献129
第三节 PCRELISA130
一、引言130
二、原理130
三、材料131
四、方法131
五、注意事项132
六、应用132
七、小结134
参考文献135
第四节 原位PCR135
一、引言135
二、基本原理135
三、原位PCR方法分类及其设计方案136
四、原位PCR基本步骤138
五、原位PCR方法的选择139
六、原位PCR操作注意事项140
七、原位PCR存在的问题和结果分析141
八、原位PCR的应用142
九、原位PCR操作程序示例142
十、小结144
参考文献145

第八章 PCR芯片146
**节 PCR芯片的结构及其工作原理146
一、引言146
二、原理146
三、方法149
四、应用149
五、小结149
参考文献150
第二节 纳升高通量PCR150
一、引言150
二、原理150
三、材料151
四、实验方法151
五、注意事项151
六、应用152
七、小结152
参考文献152
第三节 微流控PCR152
一、引言152
二、原理153
三、材料153
四、方法154
五、应用154
六、小结154
参考文献154
第四节 连续流热梯度PCR154
一、引言154
二、原理155
三、材料155
四、操作方法155
五、注意事项155
六、应用156
七、小结156
参考文献156
第五节 PCR芯片的应用156
一、引言156
二、应用157
三、注意事项158
四、小结159
参考文献159

第九章 电子PCR和数字化PCR160
**节 电子PCR160
一、引言160
二、ePCR概念160
三、ePCR的基本原理161
四、与ePCR相关的数据库162
五、ePCR的使用方法162
六、应用165
七、致谢168
参考文献168
第二节 数字PCR和微流体数字PCR
技术169
一、引言169
二、数字PCR的原理170
三、数字PCR的操作及应用170
四、微流体数字PCR173
参考文献177

第十章 其它PCR方法179
**节 高(G＋C)含量DNA的PCR扩增179
一、使用增强剂改善高(G＋C)含量DNA模板的PCR扩增179
二、NaOH对模板进行预处理改善高(G+C)含量DNA的PCR扩增182
三、利用高温PCR体系改善高(G+C)含量DNA模板的PCR扩增183
四、应用183
五、小结184
参考文献184
第二节 长片段PCR185
一、引言185
二、原理185
三、材料185
四、方法186
五、注意事项187
六、应用189
七、小结190
参考文献191
第三节 利用热激活引物进行热启动PCR191
一、引言191
二、原理191
三、材料192
四、方法192
五、注意事项194
六、应用194
七、小结196
参考文献197
第四节 融合PCR197
一、引言197
二、融合PCR的原理197
三、应用于基因插入的融合PCR的具体操作步骤198
四、融合PCR的应用198
五、融合PCR操作方法的注意事项201
六、小结202
参考文献202
第五节 不依赖连接反应的克隆PCR203
一、引言203
二、基本原理203
三、材料204
四、方法204
五、注意事项206
六、应用206
参考文献207
第六节 菌落PCR208
一、引言208
二、原理208
三、材料208
四、操作方法208
五、注意事项209
六、应用209
七、小结209
参考文献209

第十一章 PCR在基因分型中的应用210
**节 任意引物PCR210
一、引言210
二、任意引物PCR的基本原理及技术特点210
三、APPCR方法210
四、RAPPCR方法211
五、注意事项212
六、应用213
七、小结216
参考文献216
第二节 通用PCR217
一、引言217
二、原理217
三、材料217
四、方法217
五、注意事项219
六、应用219
七、小结220
参考文献220
第三节 repPCR221
一、引言221
二、基本原理221
三、材料221
四、方法223
五、注意事项224
六、应用225
七、小结226
参考文献227
第四节 序列特异性引物PCR227
一、引言227
二、原理228
三、材料228
四、方法228
五、注意事项230
六、应用与小结231
参考文献231
第五节 简单序列重复区间PCR231
一、引言231
二、原理231
三、材料232
四、方法232
五、注意事项233
六、应用233
七、小结234
参考文献234
第六节 钳制PCR235
一、引言235
二、原理235
三、材料235
四、方法236
五、注意事项236
六、应用236
参考文献236
第七节 序列特异性寡核苷酸多态性PCR237
一、原理237
二、试剂237
三、方法238
四、注意事项241
五、应用242
参考文献242

第十二章 PCR在临床诊断及流行病调查中的应用243
**节 表位特异ＰＣＲ243
一、引言243
二、原理243
三、材料243
四、方法243
五、应用244
六、小结244
参考文献244
第二节 双标记PCR245
一、引言245
二、原理245
三、材料245
四、方法245
五、应用245
六、注意事项245
参考文献246
第三节 降落PCR246
一、引言246
二、原理246
三、材料246
四、方法246
五、降落PCR与常规PCR的比较247
六、应用248
七、小结249
参考文献249
第四节 16SrRNAPCR250
一、引言250
二、原理250
三、材料及设备251
四、方法251
五、注意事项252
六、应用252
七、小结253
参考文献254
第五节 PCR偶联连接酶链式反应255
一、原理255
二、材料255
三、方法255
四、注意事项257
五、应用258
参考文献259
第六节 快速PCR259
一、引言259
二、原理259
三、材料260
四、方法260
五、注意事项264
六、小结266
参考文献266
第七节 稀有限制性位点PCR267
一、引言267
二、原理267
三、材料267
四、方法269
五、注意事项270
六、应用270
七、小结271
参考文献271

第十三章 PCR在法医学中的应用273
**节 小卫星可变重复序列PCR273
一、引言273
二、原理273
三、方法274
四、应用277
五、小结278
参考文献279
第二节 短串联重复序列的PCR280
一、引言280
二、原理280
三、材料281
四、方法282
五、注意事项286
六、应用286
七、小结288
参考文献288
第三节 单核甘酸多态性PCR289
一、引言289
二、原理289
三、材料及方法292
四、SNPPCR检测方法293
五、数据库295
六、应用296
七、小结298
参考文献298
第四节 全基因组PCR300
一、引言300
二、全基因组PCR的种类300
三、基因组DNA模板的制备304
四、不同WGA方法的比较305
五、WGA的产物分析及应用305
六、小结307
参考文献308
第五节 单分子PCR309
一、引言309
二、原理309
三、材料309
四、方法309
五、注意事项310
六、SMPCR的应用310
七、小结311
参考文献311

第十四章 PCR在遗传病诊断中的应用312
**节 多重PCR312
一、引言312
二、原理312
三、材料313
四、方法313
五、常见问题的解决316
六、应用317
七、小结322
参考文献322
第二节 常用的等位基因特异性PCR325
一、引言325
二、原理325
三、材料325
四、方法325
五、注意事项327
六、对等位基因特异PCR的改进327
七、应用与小结328
参考文献329
第三节 简单等位基因辨别PCR329
一、引言329
二、原理329
三、材料331
四、方法331
五、注意事项331
六、应用与小结332
参考文献332
第四节 LDNA标记的等位基因特异性PCR332
一、引言332
二、原理332
三、材料332
四、方法333
五、注意事项334
六、应用与小结334
参考文献334
第五节 同源一步荧光等位基因特异性PCR334
一、引言334
二、原理335
三、材料335
四、方法335
五、注意事项337
六、应用与小结337
参考文献337
第六节 低温变性共扩增PCR337
一、引言337
二、原理338
三、材料339
四、方法339
五、小结339
参考文献339
第七节 限制性片段长度多态性PCR340
一、原理340
二、材料341
三、操作方法341
四、注意事项342
五、应用342
参考文献343
第八节 PCR变性梯度凝胶电泳343
一、原理343
二、材料343
三、操作方法344
四、注意事项345
五、应用345
参考文献346

第十五章 PCR在癌症诊断中的应用347
**节 甲基化特异PCR347
一、引言347
二、基本原理347
三、材料347
四、方法348
五、注意事项349
六、应用350
七、小结351
参考文献351
第二节 差异显示PCR352
一、引言352
二、原理352
三、方法353
四、应用356
五、小结358
参考文献358
第三节 PCR单链构象多态性359
一、原理359
二、材料360
三、方法360
四、注意事项362
五、应用363
参考文献363
第四节 单细胞PCR364
一、引言364
二、基本原理364
三、材料和方法364
四、注意事项367
五、应用368
六、小结368
参考文献369

第十六章 PCR在动物学中的应用370
**节 微卫星PCR在动物分类和进化中的应用370
一、引言370
二、基本原理370
三、材料371
四、方法371
五、注意事项371
六、应用372
七、小结372
参考文献372
第二节 巢式PCR在动物疾病诊断中的应用373
一、引言373
二、基本原理373
三、材料373
四、方法373
五、注意事项374
六、应用374
七、小结375
参考文献375
第三节 T接头介导PCR在转基因动物外源基因定位中的应用375
一、引言375
二、原理376
三、材料376
四、方法376
五、注意事项377
六、应用378
七、小结378
参考文献378
第四节 等温扩增技术在动物学中的应用378
一、引言378
二、基本原理378
三、材料379
四、方法379
五、注意事项381
六、应用382
七、小结383
参考文献383
索引384