《生物化学实验指导（第二版）》包括生物化学实验室基础知识、生物化学技术原理、生物化学实验和结构化PBL实验，从实验基本操作和实验规范入手，强调对基础实验原理和常用实验内容的掌握。 可作为高等学校食品科学与工程、生物工程等专业的实验课程教材，医药和农林等专业学生可根据各自特点选择使用，也可为相关教师进行PBL实验教学改革提供参考。

生物大分子的制备过程包括选材、 细胞的破碎和细胞器的分离、 生物大分子的提取和分离、 样品的纯化, 以及样品的浓缩干燥和储存等方面。 生物大分子的制备是一件十分细致的工作, 既要设法得到它们的纯品, 又要努力保持其生物活性。 有时制备一个较高纯度的蛋白质、 酶或核酸, 需要付出较长时间的艰苦劳动。 生物大分子制备方法的选择是以生物大分子的性质 (如分子大小、 形状、 溶解度、 带电性质等) 为依据的 (表 2-1)。 对于结构和理化性质不同的生物大分子, 所选用的分离提纯方法也不相同。 在制备生物大分子的过程中, 为了随时了解所用方法的优劣、 选择条件的效果如何、 追踪提纯物质含有何种组分, 以及纯度和得率如何, 必须对所提纯的生物大分子随时进行分析鉴定。 因此在提纯以前, 必须首先确定对生物大分子的相应分析鉴定方法。 在分离、 纯化过程中每一步都对生物大分子的比活力 (总活力除以总蛋白量的值)、 得率 (每一步骤所得总活力与**步所得总活力的百分比, 设开始时的总活力为 ****) 和提纯倍数 (每一步骤所得比活力与**步所得的比活力的比值, 设开始时为 1) 进行测定。 现以猪肝异柠檬酸脱氢酶提纯过程为例, 将提纯过程的各步追踪数字列于表 2-2。

第1部分 生物化学实验室基础知识 一、生物化学实验基本要求 (一) 实验记录 (二) 实验报告 (三) 实验报告评分标准 二、实验室基本操作 (一) 玻璃仪器的洗涤与清洁 (二) 塑料器皿的清洗 (三) 清洗液的原理与配制方法 (四) 量器类的使用方法 (五) 过滤方法 (六) 试管及离心管中液体的混匀操作 三、几种常规仪器设备的使用 (一) 分光光度计 (二) 电子天平 (三) 干燥箱和恒温箱 (四) 恒温水浴锅(槽) (五) 离心机 第二部分 生物化学技术原理 一、生物大分子的制备及鉴定 (一) 盐析技术 (二) 透析和超滤 (三) 减压浓缩和冷冻干燥 二、层析技术 (一) 吸附层析 (二) 分配层析 (三) 离子交换层析 (四) 凝胶过滤层析 (五) 亲和层析 (六) 疏水作用层析 三、电泳技术 (一) 基本原理 (二) 影响泳动率的因素 (三) 电泳技术的种类 四、聚合酶链式反应（PCR）技术 (一) PCR 原理 (二) 常规PCR 反应体系与反应参数 (三) 反转录PCR (四) 荧光定量PCR 第三部分 生物化学实验 一、基础实验 实验一 苯酚-硫酸法测定水溶性多糖 实验二 氨基酸纸上层析 实验三 糖的硅胶G 薄层层析 实验四 磷脂的分离与鉴定——薄层层析法 实验五 甲醛滴定法定量测定氨基酸 实验六 蛋白质的两性反应和等电点的测定 实验七 蛋白质浓度测定 实验八 微量凯氏定氮法测总蛋白 实验九 核酸定量测定 实验十 维生素C 定量测定——2,6二氯酚靛酚滴定法 实验十一 **液相色谱法测定果蔬中的维生素C 含量 实验十二 气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分 二、综合性实验 实验十三 蔗糖酶的提取及初提纯 实验十四 蔗糖酶的纯化——离子交换层析法 实验十五 蔗糖酶活力的测定 实验十六 蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算 实验十七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 实验十八 蔗糖酶的固定化及活力测定 三、选择性实验 实验十九 底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定 实验二十 酶的特异性、温度及pH 对酶活力的影响 实验二十一 大豆总异黄酮的提取及含量测定 实验二十二 类胡萝卜素的色层分析及鉴定 实验二十三 组织DNA 的提取及定量测定 实验二十四 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 实验二十五 纸电泳法定量分析腺苷三磷酸 实验二十六 葡聚糖凝胶层析法测定蛋白质的相对分子质量 实验二十七 酶联免疫吸附实验(ELISA) 测定乳汁中孕酮含量 实验二十八 血清蛋白质的层析分离——血清γ-球蛋白的分离纯化(分子筛层析法) 实验二十九 血清蛋白质的电泳分离——醋酸纤维素薄膜电泳 实验三十 脲酶的凝胶过滤分离纯化 实验三十一 血清蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 实验三十二 肝糖原的提取和定量 实验三十三 蛋白质印迹分析 实验三十四 单向定量免疫电泳 实验三十五 Trizol 法提取总RNA 实验三十六 聚合酶链式反应扩增目的DNA 片段 实验三十七 两步法反转录聚合酶链式反应扩增目的DNA 片段 第四部分 结构化PBL 实验 一、结构化PBL 二、结构化PBL 实验流程及教学要求 三、实施案例：蔗糖酶的分离纯化与鉴定 四、PBL 实验报告组成与要求 附录 附录一 生物化学实验室规则 附录二 实验室**及防护知识 附录三 常用数据表 参考文献