本书介绍了基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术。全书分为三部分,**部分为基础性实验,针对分子生物学基本实验技能的培养,主要介绍一些短小独立的分子生物学和基因工程基本实验方案,由于每个实验可在半日内完成,并且成功率较高,这些实验特别适合于本科实验教学的日程安排。第二部分为综述性实验,实验略微复杂,适合于高年级本科生。第三部分为研究性实验,实验内容贴近科研工作,以培养独立科研能力为主要目的。
本书的实验方法严谨可靠,可操作性强,不仅可以作为高等师范院校生命科学专业的本、专科学生实验课程教材,也可供非师范院校相关专业的学生和生命科学工作者参考。

**部分 基础性实验
实验1 质粒的分离——碱性SDS法
【实验目的】
1.学习碱法分离质粒的基本原理。
2.掌握碱法分离质粒的操作方法。
【实验原理】
质粒(plasmid)是染色体之外裸露的、具有自主复制能力的、以超螺旋状态存在于细胞内的双链DNA分子。质粒的分离是分子生物学研究中*基本的技术,目前提取质粒的方法很多,比如CsC1梯度离心法、煮沸法、硅石粉法、碱性SDS法等。本实验所用的碱性SDS法(简称碱法)是一种经典的分离质粒DNA的方法,其基本原理是利用染色体DNA与质粒DNA在变性程度和复性速度差异,即在pH>12的碱性条件下,大肠杆菌的线性染色体由于氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,但在该条件下,质粒由于其共价闭合环状超螺旋结构特点,两条互补链间的氢键没有完全破坏,两条链仍然部分地结合在一起,当将溶液的pH调至中性时,质粒DNA会快速复性,染色体DNA则由于分子很大,难以复性,在高盐溶液中,变性的染色体DNA相互缠绕,形成不溶性DNA-蛋白质-SDS大分子复合体,与细胞碎片一起被离心除去,而质粒DNA存留在上清液中,可用异丙醇或乙醇沉淀上清溶液中的质粒DNA,获得纯度较高的质粒。
【实验器材、材料与试剂】
1.器材
恒温摇床、超净工作台、高压**锅、高速台式离心机、微量取液器、Tip头、1.5 ml Eppendorf管。
2.材料
含pUC18质粒的大肠杆菌DH5a或JM109菌株。
3.试剂
(1)LB液体培养基
称取胰蛋白质胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g溶于950ml水中,用0.4 mol/LNaOH调节pH至7.0,定容至1L,高温高压**。
……

**部分 基础性实验
实验1 质粒的分离——碱性SDS法
实验2 Silica硅石粉法纯化质粒
实验3 离心柱法提取质粒DNA
实验4 质粒的提取——煮沸法
实验5 核酸琼脂糖凝胶电泳及“玻璃奶”法纯化回收DNA片段
实验6 离心柱法回收琼脂糖凝胶中DNA片段
实验7 DNA片段的连接(向质粒载体中插入外源DNA)
实验8 E.coLi感受态细胞的制备、转化及转化子的鉴定(蓝白斑筛选法)
实验9 聚合酶链式反应(PCR)技术
实验10 菌落PCR方法快速筛选细菌重组子
实验11 重组子的插入方向鉴��(酶切法)
实验12 噬菌体铺板
实验13 M13噬菌体DNA的提取
实验14 SDS法小量提取植物基因组DNA
实验15 CTAB法小量提取植物基因组DNA
实验16 动物组织细胞基因组DNA提取
实验17 血液基因组DNA的纯化分离
实验18 Trizol试剂快速提取(动)植物总RNA
实验19 总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳检测
第二部分 综合性实验
实验20 反转录PCR
实验21 植物启动子表达的组织特异性——β-葡萄糖醛酸糖苷酶(GUS)组织化学染色
实验22 外源基因在原核细胞中表达及分析——谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白质的表达及纯化
实验23 外源基因在原核细胞中表达及分析——His6标记蛋白质的原核表达和纯化
实验24 Western-blotting分析
实验25 高灵敏Western-blotting分析(化学发光法)
第三部分 研究性实验
实验26 地高辛标记探针的Southern杂交
实验27 菌落原位杂交
实验28 转基因植物的PCR检测
实验29 花序浸泡法转化拟南芥及转化子的筛选
实验30 叶盘法转化烟草
参考文献

本书是“生物学基础课系列实验教材”之一,全书共分3个部分,收录了30个实验,对基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术作了系统介绍。具体包括Silica硅石粉法纯化质粒、聚合酶链式反应(PCR)技术、动物组织细胞基因组DNA提取、反转录PCR、地高辛标记探针的Southern杂交等。该书可供各大专院校作为教材使用,也可供从事相关工作的人员作为参考用书使用。