本篇主要介绍人体显微形态学实验的常用仪器和基本实验方法,包括多种显微镜的结构和使用,光镜和电镜的常用制片方法,组织化学、免疫组织化学和原位杂交技术以及组织细胞培养技术等。
显微镜是人体显微形态学实验的常用仪器,包括多种光学显微镜和电子显微镜,本章主要介绍医学常用显微镜的基本结构和使用方法。
**节 普通光学显微镜的结构和使用
【实验目的】
(1)掌握普通光学显微镜的低倍镜、高倍镜及油镜的使用方法。
(2)了解普通光学显微镜的基本构造及保护要点。
【实验原理】
普通光学显微镜是一种精密的光学仪器,是生物医学研究不可缺少的工具。显微镜的镜头由一套透镜组成,相当于一个凸透镜,普通光学显微镜通常能将物体放大1500~2000倍。显微镜的放大效能(分辨率)是由所用光波长短和物镜的数值孔径决定的,缩短使用的光波波长或增加数值孔径可以提高分辨率。要增加数值孔径,可以提高介质折射率,当空气为介质时折射率为1,而香柏油的折射率为1.51,和载片玻璃的折射率(1.52)相近,这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜,从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积,而物镜的放大倍数越高,分辨率越高。
一、普通光学显微镜的结构
显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成(图1.1.1-1)。机械装置一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和镜座部分等;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、光源等。
(一)机械装置
镜座位于显微镜底部,支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种,活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。镜筒上接目镜,下接转换器。转换器为一个转盘,其上装3~4物镜,物镜在特定的位置与目镜构成一个放大系统。载物台又称镜台,为方形或圆形,其上有固定标本的金属片,称标本卡;**有一个通光孔;台上还有标本推动器,可向前后、左右推动标本,有的推动器上还有刻度,能确定标本的位置,便于找到变换的视
图1.1.1-1 光学显微镜的构造
野。调焦装置是调节物镜和标本间距离的调焦把手(调焦轮),分粗调焦轮和细调焦轮。转动调焦轮可上下移动载物台,从而调节焦距,得到清晰的图像。
(二)光学系统
目镜:装于