在选用有机溶剂时一般采用“相似相溶”的原则。与细胞颗粒结构如线粒体等结合的酶,有的是与脂类物质紧密结合,采用丁醇为溶剂,效果较好。丁醇在水中有一定溶解度,对细胞膜上磷脂蛋白的溶解能力强,能迅速透入酶的脂质复合物中。丁醇也能用于干燥生物材料的脱脂,但它在水溶液中解离脂蛋白的能力更强。在生化物质提取前,有时还用丙酮处理原材料,制成“丙酮粉”,其作用是使材料脱水、脱脂,使细胞结构松散,增加了某些物质的���定性,有利于提取,同时又减少了体积,便于贮存和运输。而且应用“丙酮粉”提取可以减少提取液的乳化程度及黏度,有利于离心与过滤操作。 有机溶剂既能**微生物的生长和某些酶的作用,防止目的物降解失活,也能阻止大量无关蛋白质的溶出,有利于进一步纯化。如用酸-醇法提取胰岛素既可**胰蛋白酶对胰岛素的降解作用,还能减少其他杂蛋白的共存,使后处理较为简便。 (2)液-液萃取液-液萃取是利用溶质在两个互不混溶的溶剂中溶解度的差异将溶质从一个溶剂相向另一个溶剂相转移的操作。影响液-液萃取的因素主要有目的物在两相的分配比(分配系数K)和有机溶剂的用量等。分配系数K值增大,提取效率也增大,萃取就易于进行完全。当K值较小时,可以适当增加有机溶剂用量来提高萃取率,但有机溶剂用量增加会增加后处理的工作量,因此在实际工作中,常常采用分次加入溶剂,连续多次提取来提高萃取率。 (3)溶剂萃取的注意事项 ①pH在萃取操作中正确选择pH很重要。因为在水溶液中某些酸、碱物质会解离,在萃取时改变了分配系数,直接影响提取效率。所以萃取具有酸、碱基团的物质时,酸性物质在酸性条件下萃取,碱性物质在碱性条件下萃取,对氨基酸等两性电解质,则采用pH在等电点时进行提取较好。 ②盐析 加入中性盐如硫酸铵、氯化钠等可以使一些生化物质溶解度减少,这种现象称作盐析。在提取液中加入中性盐,可以促使生化物质转入有机相从而提高萃取率。盐析作用也能减少有机溶剂在水中的溶解度,使提取液中的水分含量减少。 ⑧温度 温度升高可使生化物质不稳定,又易使有机溶剂挥发,所以一般在室温或低温下进行萃取操作。 ④乳化 液-液萃取时,常发生乳化作用,使有机溶剂与水相分层困难。去乳化的常用方法有:过滤与离心;轻轻搅动;改变两相的比例;加热;加电解质(氯化钠、氢氧化钠、盐酸及高价离子等);加吸附剂(如碳酸钙)等。 (4)液-液萃取时溶剂的选择要注意的问题 ①选用的溶剂必须具有较高选挥性,各种溶质在所选的溶剂中之分配系数差异愈大愈好。 ……