本书是在使用多年的实验讲义的基础上编写的,根据我们多年的教学、科研经验和兄弟院校的建议,对内容进行了必要的调整和修改,并补充了许多新的实验内容。在编写过程中力求做到简明、扼要、实用性强。
全书分为5章,精选了28个实验,除了生物化学的基础性实验外,还增加了有关酶分离纯化的综合性实验及基本的分子生物学实验。在附录中,主要介绍了实验室的**防护知识、常用试剂和溶液的配制、常规仪器使用说明及常用数据列表等内容。
本书适合高等院校相关学科的本科生和研究生使用。

**章 蛋白质
实验一 氨基酸的纸层析法
一、目的
色层分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类等物质的分离与分析。其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质,并且设备简单、操作容易、样品用量少、结果也较准确。
本实验的目的在于掌握纸层析法的一般原理和操作技术。
二、原理
纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。分配层析法利用物质在两种互不相溶的溶剂中分配系数���不同达到分离的目的。通常用。表示分配系数。在一定条件下,一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。
a=溶质在流动相的浓度(CL)/溶质在静止相的浓度(Cs)
本实验的层析溶剂由有机溶剂和水组成。由于滤纸纤维与水有较强的亲和力(纸上有很多-OH基与水以氢键相连),吸附很多水分,一般达滤纸重的22%左右(其中约有6%的水与纤维素结合成复合物),因此使这部分水的扩散作用降低形成静止相。而滤纸对有机溶剂的亲和力较弱,有机溶剂可以在滤纸中因毛细管作用自由流动,因此便形成了流动相。层析时,将滤纸一端浸入层析溶液中。有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处,其中的溶质因为本身分配系数的不同在两相间进行分配。分配过程为:一部分溶质随有机相移动离开原点而进入无溶质区,并重新分配,即一部分溶质从有机相又进入水相。随着有机相不断向前移动,溶质不断地在两相间进行可逆的分配,不断向前移动。各种物质在分配层析系统中两相间的分配系数不同,分配系数小的溶质在流动相中分配的数量少,移动的速率慢,所以各种溶质在层析过程中由于移动的速率不同便可以彼此分开。
……

前言
**章 蛋白质
实验一 氨基酸的纸层析法
实验二 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验三 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量
实验四 紫外吸收法测定蛋白质含量
实验五 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质的相对分子质量
实验六 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点
实验七 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳法
第二章核酸
实验一 植物基因组DNA提取(CTAB法)
实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验三 酵母核糖核酸的提取及组分鉴定
实验四 酵母核糖核酸的提制(浓盐法)
实验五 薄层层析法分离AMP、ADP和ATP
实验六 质粒DNA的分离、纯化和酶切鉴定
实验七 PCR扩增小麦持家基因Tubulin
第三章 酶
实验一 脲酶Km值的测定
实验二 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离小麦幼苗过氧化物酶同工酶
实验三 酵母醇脱氢酶的分离、提纯
实验四 苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定
实验五 过氧化物酶活性的测定
实验六 维生素C含量的测定
第四章 糖
实验一 糖酵解中间产物的鉴定
实验二 还原糖和总糖含量的测定
实验三 蔗糖含量的测定
实验四 植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
第五章 脂
实验一 粗脂肪的定量测定——索氏提取法
实验二 植物组织中丙二醛含量的测定
实验三 脂肪碘值的测定
实验四 卵黄中卵磷脂的提取和鉴定
主要参考文献
附录一
附录二