本书为普通高等教育“十一五”**级规划教材《生物化学与分子生物学》的配套教材,内容包括总论和各论,总论介绍生物化学的基本操作技术,当前生物化学与分子生物学研究常用的电泳、层析、离心分离、印迹技术和聚合酶链式反应等实验技术的原理、种类、应用和前沿;各论共有40个实验,其中蛋白质与核酸、酶学、糖、脂和生物氧化部分的实验是比较成熟的生物化学基本实验;核酸部分的实验主要是分子生物学常用技术的实验,是近几年在研究生实验课中开设并有部分实验选用到本科生实验教学中的;*后部分有8个综合性实验,在基本技能训练的基础上,对学生进行实验设计和科研入门训练。
本书语言简练,实用性强。不仅适合医学院校5年制、7年制及8年制学生使用,也适合相关人员参考。

第1章 基本操作技术
第1节 玻璃器皿的清洗
生物化学与分子生物学实验常用各种玻璃器皿,其清洁程度直接影响测量样品的可靠性和反应的准确性。因此玻璃器皿的清洁不仅是实验前后的常规工作,而且是一项重要的基本技术。玻璃器皿的清洗方法很多,需要根据实验的要求以及污物性质,选用不同的方法。洗涤的玻璃器皿要求清洁透明,玻璃表面不含可溶解的物质,水沿器壁自然下流时不挂水珠。
一、新购器皿的清洗
新购器皿表面附着油污和灰尘,特别是附着可游离的金属离子。因此,新购器皿需要用肥皂水刷洗,流水冲净后,浸于0.93mol/L Na2CO3溶液中煮沸。用流水冲净后,再浸泡于0.3-0.6mol/L HCI溶液中过夜。流水洗净酸液,用蒸馏水少量多次荡洗后,干燥备用。
二、用过玻璃器皿的清洗
1.一般非计量玻璃器皿或粗容量器皿(如试管、烧杯、量筒等)先用肥皂水刷洗,再用自来水冲洗干净,*后用蒸馏水荡洗2~3次后,倒置于清洁处晾干。
2.容量分析器皿(如吸量管、滴定管、容量瓶等)先用自来水冲洗,晾干后浸于铬酸洗液中浸泡数小时,然后用自来水和蒸馏水冲洗干净并干燥备用。
3.比色杯用毕立即用自来水反复冲洗,如有污物黏附于杯壁,宜用盐酸或适当溶剂清洗。然后用自来水、蒸馏水冲洗干净。切忌用刷子、粗糙的布或滤纸等擦拭。洗净后,倒置晾干备用。
……

第1篇 总论
实验须知
第1章 基本操作技术
第1节 玻璃器皿的清洗
第2节 吸量管的种类和使用
第3节 溶液的混匀、过滤及离心
第4节 实验样品的制备
第5节 分光光度法
第2章 电泳技术
第1节 电泳的基本原理
第2节 影响电泳的主要因素
第3节 区带电泳的分类
第4节 几种常见的电泳方法
第5节 二维电泳
第3章 层析技术
第1节 层析技术的分类
第2节 层析中的常用术语
第3节 纸层析
第4节 薄层层析
第5节 离子交换层析
第6节 凝胶层析
第7节 亲和层析
第4章 离心分离技术
第1节 离心分离技术的原理
第2节 离心机的分类与特点
第5章 印迹技术
第1节 Southern印迹
第2节 Northern印迹
第3节 斑点杂交
第4节 Western印迹
第6章 聚合酶链式反应
第1节 PCR技术概述
第2节 PCR技术的基本原理
第3节 PCR反应条件的优化
第4节 PCR技术的扩展
第5节 PCR中应注意的问题
第6节 PCR在医学中的应用
第2篇 各论
第7章 蛋白质与氨基酸
实验1 蛋白质含量的测定
实验2 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳定量测定
实验3 凝胶层析法分离血红蛋白和DNP-鱼精蛋白(或DNP-酪蛋白)
实验4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量
实验5 蛋白质的沉淀反应
实验6 酪蛋白等电点的测定
实验7 氨基酸的薄层层析
实验8 DNS-氨基酸聚酰胺薄膜双向层析
第8章 酶学
实验9 影响酶活性的因素
实验10 蔗糖酶的专一性
实验11 丙氨酸转氨酶活性的测定
实验12 乳酸脱氢酶同工酶的分离
实验13 转氨基反应
实验14 琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性**
实验15 米氏常数的测定
第9章 糖、脂和生物氧化
实验16 饥饿和饱食对肝糖原含量的影响
实验17 脂蛋白的分离和提纯
实验18 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
实验19 血清三酰甘油测定
实验20 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定
实验21 血清总胆固醇含量测定
实验22 乳酸测定
实验23 血中葡萄糖含量的测定
第10章 核酸
实验24 细胞核的分离和纯化
实验25 核酸含量的测定
实验26 酵母RNA的提取及组分鉴定
实验27 真核细胞基因组DNA的制备与定量
实验28 DNA的限制性酶切反应
实验29 Southern印迹
实验30 Northern印迹
实验31 PCR扩增技术
实验32 随机扩增多态性DNA技术
第11章 综合性实验
实验33 家兔免疫血清γ-球蛋白的分离与纯度鉴定
实验34 蛋白质的分离、提取、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳圾Western印迹
实验35 脂蛋白的分离、提纯和电泳鉴定
实验36 大肠埃希菌感受态细胞的制备及质粒DNA分子导人原核细胞、提取、纯化鉴定
实验37 碱性磷酸酶的提取、比活性及km值的测定
实验38 RT-PCR
实验39 细菌双杂交质粒DNA的提取、纯化及鉴定
实验40 apoE基因多态性分析
主要参考资料
附录

本书为普通高等教育“十一五”**级规划教材《生物化学与分子生物学》的配套教材。全书共分两篇。**篇总论除了介绍生物化学的基本操作技术外,还系统介绍了当前生物化学与分子生物学研究常用的电泳、层析、离心分离、印迹技术和聚合酶链式反应等实验技术的原理、种类、应用和前沿。第二篇各论共有40个实验。本书不仅适合医学院校5年制、7年制及8年制学生使用,也适合相关人员参考。