《生物工程技术实验指导》是一本与目前高校生物工程与生物技术专业实验课教学相适应的实验指导用书,是《分子生物学实验指导》的姊妹篇,内容包括现代生物技术的几大领域(基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程、发酵工程)中的*主要技术。全书分为两篇,**篇,讲述常用生物工程实验技术及其原理;第二篇,学生实验,包括4组,共22个实验。书中详细叙述了实验的具体操作,罗列了每个实验所需的仪器和材料,并对实验中应注意的地方给予了提示。书后有各种常用方法和数据的附录,简明实用。能让学生真正掌握现有和*新的生物技术实验技能,并提高学生的综合动手能力和实验素质。
《生物工程技术实验指导》适于作为大专院校生物科学、生物技术、生物工程专业实验教学用书,也可供生物技术有关研究人员、工程技术人员、生物高新技术企业管理人员及中学生物教师参者。

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**章外源基因在哺乳动物中的表达与检测
虽然很多哺乳动物的蛋白质都已在原核细胞、酵母细胞及昆虫细胞表达系统中得到表达,并且已获得一些有活性的蛋白质,但仍遇到了不少难以解决的问题。哺乳动物的蛋白质在生物合成中,当多肽链生产后,常常需要经过较复杂的修饰与加工,才能成为有功能的蛋白质,常见的翻译后修饰与加工包括多肽链的折叠、胱氨酸的转化、二硫键的形成、脱甲酰基、多聚化、多肽链的切割、磷酸化及糖基化等。特别是对于糖蛋白类生物**来说,表达产物是否糖基化以及糖基化的类型,常常关系到**的生物活性、**代谢的动力学、**在体内的稳定性以及免疫原性等。例如,原核细胞表达的红细胞生成素,由于原核细胞中缺少内质网、高尔基体等内膜系统,糖基化不能进行,表达产物为非糖基化产物,这样的产物在体内缺少应有的活性。采用酵母和昆虫细胞表达系统时,蛋白产物虽然可被糖基化,但由于这些细胞中糖基化酶不同于哺乳动物细胞,表达产物上的寡糖链常出现明显差别,使得它们的免疫原性发生变化,进入体内后,被免疫系统所识别并被清除。
鉴于原核表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统等存在着不容忽视的缺陷,哺乳动物细胞表达系统研究、开发与利用就显得十分必要了。目前,有关哺乳动物细胞表达系统中的宿主细胞、表达载体、转染方法等方面的研究取得了较大的进展,并已得到了应用。据有关资料统计,现已投放市场以及正在进行临床试验**的蛋白质及多肽**,有70%是通过哺乳动物细胞表达系统生产的。

**篇 常用生物工程实验技术及原理
**章 外源基因在哺乳动物中的表达与检测
第二章 基因突变和蛋白质工程
第三章 色谱(层析)技术
第四章 蛋白电泳技术
第五章 生物大分子的分离纯化及鉴定
第六章 蛋白质的免疫检测技术
第七章 酶工程概述及酶的固定化
第八章 单克隆抗体制备技术
第九章 转基因动物技术
第十章 植物细胞工程的基本原理和方法
第十一章 微生物发酵与发酵工程
第十二章 基因工程制药技术与原理
参考书目

第二篇 学生实验
基因工程和蛋白质工程
实验一 J3一半乳糖苷酶基因(faz)的定点突变
实验二 B一半乳糖苷酶基因(zacz)的定点突变片段的克隆
实验三 J3一半乳糖苷酶基因(zacz)在大肠杆菌中的表达及活性检测
实验四 B一半乳糖苷酶基因(zacz)在真核细胞McF一7中的表达
实验五 野生型及点突变的MMLV反转录酶的活力和构象比较
实验六 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验七 蛋白质的变性和复性
酶工程
实验八 溶菌酶的提取和系列性质测定
实验九 植物细胞培养和次生代谢产物生产
实验十 B一半乳糖苷酶的固定化及应用
实验十一 亲和层析法分离植物钙调素结合蛋白
实验十二 蛋白质的N端氨基酸测定
细胞工程
实验十三 小鼠单克隆抗体的制备
实验十四 绿色荧光蛋白基因在哺乳动物细胞中的表达与检测
实验十五 显微注射法制备转基因小鼠
实验十六 烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生
实验十七 烟草原生质体分离和体细胞杂交
实验十八 农杆菌与烟草叶片的共培养和转基因细胞的筛选与鉴定
发酵工程
实验十九 固体发酵法生产柠檬酸
实验二十 液体发酵法生产链霉素
实验二十一 基因工程**制备技术

附录
附录一 生物工程技术常用缓冲液、培养基及重要试剂的配制
一、常用缓冲液的配制
二、常用基因工程缓;中液
三、常用电泳缓冲液
四、常用凝胶加样缓冲液
五、常用限制性内切酶酶切位点及缓冲液
六、基因工程常用贮存液
七、常用培养基
八、常用植物组织培养培养基
九、常用抗生素溶液
附录二 生物工程技术相关实验资料和常用数据
一、常用单位及换算方法
二、常用核酸、蛋白质换算数据
三、线性DNA的长度(kd)与其相对分子质量的关系
四、氨基酸符号及相应密码子
五、常见市售酸碱的浓度
六、各种浓度酸碱贮存液的近似pH值
七、硫酸铵饱和度的常用表
八、某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数
九、几种主要同位素的衰变及半衰期
十、离心机转速与相对离心力的换算和列线图
十一、层析法用于生物工程的常用数据
十二、细胞培养中可能出现的问题、原因及解决方法
十三、菌种保存