本书介绍了基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术。全书分为三部分,**部分为基础性实验,针对分子生物学基本实验技能的培养,主要介绍一些短小独立的分子生物学和基因工程基本实验方案,由于每个实验可在半日内完成,并且成功率较高,这些实验特别适合于本科实验教学的日程安排。第二部分为综述性实验,实验略微复杂,适合于高年级本科生。第三部分为研究性实验,实验内容贴近科研工作,以培养独立科研能力为主要目的。
本书的实验方法严谨可靠,可操作性强,不仅可以作为高等师范院校生命科学专业的本、专科学生实验课程教材,也可供非师范院校相关专业的学生和生命科学工作者参考。

**部分 基础性实验
实验1 质粒的分离——碱性SDS法
实验2 Silica硅石粉法纯化质粒
实验3 离心柱法提取质粒DNA
实验4 质粒的提取——煮沸法
实验5 核酸琼脂糖凝胶电泳及“玻璃奶”法纯化回收DNA片段
实验6 离心柱法回收琼脂糖凝胶中DNA片段
实验7 DNA片段的连接(向质粒载体中插入外源DNA)
实验8 E.coLi感受态细胞的制备、转化及转化子的鉴定(蓝白斑筛选法)
实验9 聚合酶链式反应(PCR)技术
实验10 菌落PCR方法快速筛选细菌重组子
实验11 重组子的插入方向鉴定(酶切法)
实验12 噬菌体铺板
实验13 M13噬菌体DNA的提取
实验14 SDS法小量提取植物基因组DNA
实验15 CTAB法小量提取植物基因组DNA
实验16 动物组织细胞基因组DNA提取
实验17 血液基因组DNA的纯化分离
实验18 Trizol试剂快速提取(动)植物总RNA
实验19 总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳检测
第二部分 综合性实验
实验20 反转录PCR
实验21 植物启动子表达的组织特异性——β-葡萄糖醛酸糖苷酶(GUS)组织化学染色
实验22 外源基因在原核细胞中表达及分析——谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白质的表达及纯化
实验23 外源基因在原核细胞中表达及分析——His6标记蛋白质的原核表达和纯化
实验24 Western-blotting分析
实验25 高灵敏Western-blotting分析(化学发光法)
第三部分 研究性实验
实验26 地高辛标记探针的Southern杂交
实验27 菌落原位杂交
实验28 转基因植物的PCR检测
实验29 花序浸泡法转化拟南芥及转化子的筛选
实验30 叶盘法转化烟草
参考文献

**部分 基础性实验
实验1 质粒的分离——碱性SDS法
【实验目的】
1.学习碱法分离质粒的基本原理。
2.掌握碱法分离质粒的操作方法。
【实验原理】
质粒(plasmid)是染色体之外裸露的、具有自主复制能力的、以超螺旋状态存在于细胞内的双链DNA分子。质粒的分离是分子生物学研究中*基本的技术,目前提取质粒的方法很多,比如CsC1梯度离心法、煮沸法、硅石粉法、碱性SDS法等。本实验所用的碱性SDS法(简称碱法)是一种经典的分离质粒DNA的方法,其基本原理是利用染色体DNA与质粒DNA在变性程度和复性速度差异,即在pH>12的碱性条件下,大肠杆菌的线性染色体由于氢键断裂,双螺旋结构解开而变性,但在该条件下,质粒由于其共价闭合环状超螺旋结构特点,两条互补链间的氢键没有完全破坏,两条链仍然部分地结合在一起,当将溶液的pH调至中性时,质粒DNA会快速复性,染色体DNA则由于分子很大,难以复性,在高盐溶液中,变性的染色体DNA相互缠绕,形成不溶性DNA-蛋白质-SDS大分子复合体,与细胞碎片一起被离心除去,而质粒DNA存留在上清液中,可用异丙醇或乙醇沉淀上清溶液中的质粒DNA,获得纯度较高的质粒。
【实验器材、材料与试剂】
1.器材
恒温摇床、超净工作台、高压**锅、高速台式离心机、微量取液器、Tip头、1.5 ml Eppendorf管。
2.材料
含pUC18质粒的大肠杆菌DH5a或JM109菌株。
3.试剂
(1)LB液体培养基
称取胰蛋白质胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g溶于950ml水中,用0.4 mol/LNaOH调节pH至7.0,定容至1L,高温高压**。
……

本书是“生物学基础课系列实验教材”之一,全书共分3个部分,收录了30个实验,对基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术作了系统介绍。具体包括Silica硅石粉法纯化质粒、聚合酶链式反应(PCR)技术、动物组织细胞基因组DNA提取、反转录PCR、地高辛标记探针的Southern杂交等。该书可供各大专院校作为教材使用,也可供从事相关工作的人员作为参考用书使用。