《生物化学与分子生物学实验教程》(第2版)是为适应高等医科院校的实验教学改革和发展,以注重基本技能、强化学生实践能力为指导思想,在第1版的基础上修订和编写而成。《生物化学与分子生物学实验教程(第二版)》由基础性实验、综合性实验和创新设计性实验三篇构成。实验内容既有蛋白质、核酸、酶学、糖类、脂类分析,也有生物分子之间的相互作用检测,还有来源于教师们科研项目的综合性实验和创新设计性实验,有利于培养学生的实践能力、综合分析能力。附录中有常用仪器、技术等中英文词汇对照表。《生物化学与分子生物学实验教程(第二版)》内容较新颖,体系较完整,不同层次实验的培养目标有所侧重,便于不同层次教学选择。

目录 前言 **篇 基础性实验 1 实验1 蛋白质的呈色反应、沉淀现象观察及等电点的测定 3 实验2 蛋白质含量的测定 6 实验3 蛋白质电泳 16 实验4 生化指标检测 20 实验5 胰岛素、肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 26 实验6 酶的特异性及温度、pH、激活剂、**剂对酶活性的影响 28 实验7 兔肝碱性磷酸酶的分离纯化及比活性测定 31 实验8 质粒DNA的提取、酶切与鉴定 36 实验9 真核细胞基因组DNA的提取、定量和纯度测定 39 实验10 PCR扩增G6PD基因外显子11~12片段 41 第二篇 综合性实验 43 实验11 血清蛋白的盐析及清/球比值的测定 45 实验12 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性**作用 48 实验13 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定 50 实验14 动脉硬化指数的计算 54 实验15 红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性测定及家系分析 56 实验16 针刺“足三里”穴对家兔血糖浓度双向调节作用的观察 60 实验17 人血浆同型半胱氨酸的测定(ELISA方法) 62 实验18 pMD19-G6PD重组子的蓝白斑筛选及酶切鉴定 64 实验19 SDS-PAGE测定蛋白质的表观分子质量 68 实验20 血红蛋白的等电聚焦分离及其等电点测定 72 实验21 小鼠肝细胞核的分离、纯化与鉴定 77 实验22 醋酸纤维薄膜电泳技术分离乳酸脱氢酶同工酶 80 实验23 糖的硅胶G薄层层析分析鉴定 83 实验24 pThioHis(A)-G6PD重组表达质粒的鉴定 86 实验25 G6PD重组酶的诱导表达、分离及比活性测定 89 实验26 ATP、ADP和NADPH对G6PD酶促反应的影响 93 实验27 小鼠肝组织总RNA提取与RT-PCR获取真核基因片段 99 实验28 pET-32a(+)-G6PD重组表达质粒的构建与鉴定 104 实验29 小鼠G6PD的6His融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 110 实验30 6His-G6PD融合蛋白的Western Blot分析 117 实验31 免疫共沉淀G6PD相互作用蛋白质 121 实验32 G6PD表观Km值及比活性测定 125 实验33 IEF检测与G6PD相互作用的蛋白质等电点 128 实验34 SDS-PAGE分析与G6PD相互作用的免疫共沉淀产物 131 第三篇 创新设计性实验 135 实验35 小鼠PKCε相互作用蛋白质的捕获、鉴定 137 实验36 小鼠肝脏总蛋白质的双向电泳分离 140 实验37 HL-60细胞中DAPK基因甲基化状态的检测 144 实验38 胰岛素促进HepG2细胞对葡萄糖吸收的检测 147 实验39 氧化应激指标(ROS)的分析 150 实验40 siRNA干扰人肾癌细胞G6PD表达 152 实验41 双荧光素酶报告实验检测转录因子对G6PD基因的转录调控 155 实验42 乙醛脱氢酶基因突变检测的实验设计 158 实验43 自毁容貌综合征生化与分子基础探讨的实验设计 159 实验44 G6PD缺陷诊断及其分子基础探讨的实验设计 160 实验45 黑色素瘤细胞稳定过表达人G6PD基因的实验设计 161 参考文献 162 附录一 生物化学与分子生物学常用数据库和软件 164 附录二 生物化学与分子生物学常用试剂和培养基的配制方法 166 附录三 生物化学及分子生物学实验常用缩略语 169 附录四 生物化学与分子生物学实验常用词中英文对照 172