《人体显微结构学实验》的编写以培养学生的实践能力为目标,以显微形态学技术为主线,分层次、多模块,相互衔接,优化融合,从基本形态学的改变到所学知识的综合与创新,循序渐进,有利于学生夯实基础知识,在此基础上培养和提高学生的实践能力、综合分析能力和创新能力。《人体显微结构学实验》共分四篇,主要内容包括:**篇:基本实验方法。第二篇:基本性实验。第三篇:综合性实验。第四篇:设计创新性实验。 人体显微结构学实验_刘雨清_科学出版社_

**篇 基本实验方法
**节 病理大体标本的取材
病理大体标本的检查是病理学研究和诊断的*传统?*基本的技术?病理学诊断在临床诊疗中具有举足轻重的地位,而病理大体标本的取材是正确病理诊断的基础,病理大体标本的观察和取材不仅是病理医师的基本功,也是医学生学习病理学的主要方式之一?
一?大体标本的肉眼观察
(一)大体标本肉眼检查的主要内容
(1)按次序进行,检查前应阅读申请单上的各项内容,了解取材方式及标本类型,然后取出全部标本,核对正确后检查(注意避免遗漏瓶内小标本)?
(2)检查送检组织(或器官)的肉眼改变,包括病变的性质?大小?重量?形状?颜色?硬度?病灶的数目?表面形态?与周围组织和器官的关系等?
(二)大体标本肉眼观察的步骤
观察标本是何种组织或器官,实质性器官的检查顺序往往是自外向内逐一进行,如肺则先检查胸膜?肺实质?气管?血管?肺门淋巴结等;对空腔器官的检查顺序一般是自内向外逐一进行,如胃肠则先检查腔内容物?黏膜?黏膜下层?肌层?浆膜层及肠系膜等?观察要点如下:
(1)检查器官有无增大或缩小,器官增大时常出现重量增加?包膜紧张?边缘钝圆;反之则出现包膜皱缩?边缘锐利,重量��轻?
(2)检查病变的形状,可呈圆形?三角形?不规则形?分叶状?结节状等?
(3)观察器官及病变的颜色,出血常呈暗红色,脂肪组织呈黄色,坏死组织常呈黑色?
(4)检查器官组织的质地,可用质硬?质软?质韧等描述?如含有骨组织或组织钙化则质硬,组织纤维化则韧硬,**囊性变则质软?
(5)检查病变的分布?个数,病变位于表面还是器官内,弥漫还是局灶散在分布,病变是单发还是多发?
二?剖检标本的一般原则
(1)标本观察应先看表面,后看切面?首先描述标本的形态?表面特征?颜色?硬度;其次注意切面的质地?病变位置?数量及形态,有无出血?坏死?钙化等?如果送检标本为囊状,则须描述囊壁的厚度及内容物的性质?标本的大小以度量其长?宽?厚为准,某些标本需记录重量?
(2)剖检要暴露*大切面,其中一个切面须通过病灶**,便于检查?
(3)做切面时勿切到底,使一端互相连着,便于观察标本各部分的相互关系?
(4)能显示器官标本的主要管道分布?
三?选取有代表性的组织制片
(1)不同特点的病变分别取材,不遗漏重要病变?
(2)切取病变的主要部分?正常组织?病变与正常组织交界处等?
(3)恶性**局部淋巴结须分组逐个检出取材?
(4)胃肠道**须切取手术的断端,切缘可用墨汁标记,便于镜下观察定位?
(5)如果组织块较小,在不影响诊断的前提下,仍要保留一部分,以便日后特殊染色?
(6)穿刺活检的小标本,包埋时要注意不要丢失?
(7)切取组织块一般面积为1.5cm×1.5cm,厚度不超过3mm,切面须尽量平整?
四?病理大体标本取材注意事项
(1)取出所有的送检标本,量其大小,称其重量,描其色泽?质地?形状和肉眼所见?标本切开后,描述其切面的颜色?硬度?病变部位等,必要时绘图说明?
(2)对于细小的标本,如肺支气管穿刺标本?胃肠镜活检标本,应将其染上伊红颜色后,用擦镜纸或特别的脱水袋将其包好,以防漏出脱水盒的小孔?
(3)对于有传染性的标本,应先将其彻底固定后再取材,如结核瘤等?
(4)对于罕见特殊的标本,在不影响诊断的前提下,尽量保存好大体标本,以利于教学标本和陈列标本的收集?
(5)边取材边固定,以防组织自溶?
(6)对于骨髓穿刺标本,可先用10%硝酸溶液浸泡30分钟左右,再与其他标本一起处理?
(7)骨组织和钙化的标本应彻底脱钙,检查时用大头针顺利插入标本即可?
(8)活检组织不能太厚,以防脱水不彻底,不利于制片?
(9)每取完一例标本所用的刀?剪?盘?镊?切板都应冲洗干净,以防污染?
(10)组织取完后放入标记好的盒内,放入固定液中?
五?标本的固定
普通病理标本常用固定液为10%中性福尔马林液,固定时间为12~24小时,固定液的量一般为所固定标本的4~10倍,冷冻切片标本一般不固定?
(刘雨清)
第二节 组织切片的制作
组织切片技术是组织学?胚胎学?病理学及生物学等学科观察和研究组织?细胞的生理?病理形态变化的一种重要手段?其原理是用固定剂固定组织?细胞,保持其原有的微细结构,利用切片机将组织切成薄片来进行观察?组织制片方法有多种,如石蜡包埋切片法?火棉胶包埋切片法?冷冻切片法等?在此介绍常用的石蜡包埋切片法和冷冻切片法?
一?石蜡切片的制备方法
【实验目的】
掌握石蜡包埋切片的基本原理及制备步骤?
【实验原理】
将组织经过固定?脱水?浸蜡?透明?包埋后进行切片,然后染色得到结果?固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来,以便观察?脱水是除去组织中的水分,以利于透明和浸蜡?组织的透明是便于透蜡包埋?包埋是使石蜡透入组织内部,把软组织变为适当硬度的包埋块,以便切成薄片?*后使用切片机,将包埋块中组织切成薄片?此方法制备的切片能完好地长期保存组织原有的结构,透明度好,有利于镜下观察组织图像?
【实验准备】
1.器材 旋转式组织切片机,组织包埋机,脱水机或染色缸等?
2.耗材 载玻片,石蜡,固定液,梯度乙醇,二甲苯,防脱片剂等?
【实验方法】
1.取材 取材是根据实验的目的和要求及病变程度而合理取得的组织材料?可取自动物?外科手术切除标本?活检标本或尸检标本?组织越新鲜越好,人体组织一般应在死后2小时内取材;动物组织则应在处死后立即取材,并迅速投入固定液中,以保证原有的组织学形态?材料的大小一般不超过1.2cm×0.5cm×0.2cm?切取组织的刀剪应锋利,切割时不能来回锉动;夹取组织时,镊子要轻,切勿挤压,以免损伤组织?组织块上如有血液?污物和黏液粘着,应用生理盐水洗涤后再入固定液?注意确定取材部位和包埋切面的方向,切除不需要的部分?
2.固定 为了防止组织细胞死后发生变化,防止自溶与腐败,保持组织内细胞原有的结构和形态,使其与生活状态时相似,切取的组织块应立即投入固定液中?常用的固定液有10%甲醛溶液(formalin)?Bouin液(由苦味酸?甲醛溶液?冰乙酸混合配成)?Zenker液(由重铬酸钾?升汞?冰乙酸混合配成)等?常用的固定方法有浸入法及灌注法两种?一般固定24小时,取出后流水冲洗?
3.脱水 除去固定好的组织块中的水分,以利于透明?常用的脱水剂是一系列不同浓度的乙醇?一般从低浓度向高浓度逐级脱水,要经过50%?70%?80%?90%?95%?****的梯度乙醇溶液,将水分脱净?组织在90%以下的乙醇中可以过夜,90%?95%?****乙醇溶液中需要的时间根据组织块的大小及种类而定,一般为2小时?
丙酮也是一种脱水剂,但因其脱水能力很强,对组织有强烈的收缩作用,在制作科研?教学切片时一般不用,但因其沸点低,脱水能力强,加温至沸点时在短时间内可脱水彻底,
故病理外检快速石蜡切片时可用丙酮脱水剂?
4.透明 石蜡不溶于乙醇,必须用二甲苯或苯替换乙醇,此时组织块已变为透明?透明时间一般不超过1小时,以光线基本能透过组织块为宜?若组织块**有白色浑浊,说明脱水不够,应重复脱水过程;若透明过度,则组织块变脆,切片时不易切出完整的片子?
5.浸蜡 是将包埋剂(石蜡)透过整个组织的过程,一般需要经过苯石蜡?软石蜡?硬石蜡?浸蜡过程在温箱中进行,蜡要预先熔好?浸蜡的时间可根据组织块的大小及其组织种类而定,一般厚度约为0.2cm的实质性器官的浸蜡时间为2~3小时,小标本的浸蜡时间约为1小时?
6.包埋 准备一定形状的容器,如纸盒等,倒入熔化的石蜡,将浸透石蜡的组织块夹起,将要切的面向下放入蜡中,当石蜡表面凝结成一层蜡皮时,迅速放入冷水中,使其加速凝结成块?包埋时夹取组织的镊子应随时烤热,以免石蜡凝结后黏附在镊子上,造成蜡块凝固不均匀?包埋过程应迅速,组织从浸蜡杯中取出的时间尽量缩短?若时间过长,组织块表面会有一层凝固层,不能与包埋框内的石蜡融为一体,使组织与周围石蜡块形成分离状态,切片将无法进行?若包埋后发现浸蜡不够或包埋的不好,可将蜡块熔化,重新浸蜡包埋?
7.切片 将包埋好的蜡块修好,固定于切片机上,再将切片刀固定好,调整好刀的角度(一般为4°~10°)及切片的厚度,便可进行切片,一般片厚4~6μm?摇动切片机的转轮把手,刀片便可上下移动,每次即可切下一片组织,其厚度均匀一致?若连续转动把手,则可形成连续的切片,呈带状?用毛笔和小镊子将带状的蜡片托起后放入展片仪的水槽内(水温约45℃),借助水的张力和水的温度将蜡片上的皱褶展平,待完全平整后,捞于处理好的载玻片中段上,沥干水分,在载玻片上编号,置于60℃左右温箱内烤片,脱去熔化组织间隙的石蜡即可进行后续实验?
附:载玻片的处理
(1)清洁液浸泡至少12小时?
清洁液一般选用酸溶液,常用的为重铬酸钾?浓硫酸及蒸馏水的混合溶液?此清洁液有多种不同的配制方案,如重铬酸钾300g?浓硫酸300ml?蒸馏水3000ml等,但配制方法均是先将重铬酸钾溶于水,再缓慢加入浓硫酸,边加边搅拌?
(2)流水充分冲洗后,蒸馏水冲洗至少3遍?
(3)烘干后,置于95%乙醇溶液中浸泡2小时,晾干备用?
(4)防脱片剂的选择及使用?
清洁好的载玻片要涂上一层防脱片剂,以防贴上的切片在后续的实验中脱落?常用的防脱片剂及使用:
1)蛋白甘油:新鲜蛋白(鸡蛋清)30ml,纯甘油30ml,麝香草粉0.5g,混合溶解后,过滤,保存于冰箱内,保存期大约为一年?使用时,滴少许于绸布上,用绸布在载玻片的贴片面均匀涂擦,晾干后保存在切片盒中(标记好处理面,使用时不能贴反)?
2)氨丙基三乙氧基硅烷(APES):市售APES成品按1∶50的比例用丙酮稀释后,将处理好的干净载玻片置于其中60秒,再用丙酮冲洗60秒,后蒸馏水冲洗1分钟,晾干备用?
3)铬钒明胶:铬钒0.5g,明胶5g,蒸馏水1000ml?配制方法:以500~800ml的蒸馏水加温溶解明胶,待其完全溶解后,再加入铬钒,*后加蒸馏水至1000ml?如有沉渣,应过滤后使用?包被时温度应控制在70℃,包被后载玻片应置于阴暗通风处自然晾干后备用?
4)多聚赖氨酸(PLL):市售PLL按1∶10的比例用去离子水稀释后,将处理好的玻片置于其中浸泡5分钟,后置于60℃烤箱中烘烤1小时或室温下过夜干燥,干燥后即可使用?
【实验结果】
切片应厚薄均匀,贴片平整?
二?恒冷箱切片的制备方法
【实验目的】
掌握恒冷箱切片的基本原理及制备步骤?
【实验原理】
恒冷箱切片机的基本结构是将切片机置于低温密闭室内,故切片时不受外界温度和环境影响?恒冷箱切片(又称冷冻切片)的制备是将组织在冷冻状态下直接用恒冷箱切片机切片?它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冷冻至坚硬后进行切片的?由于此法不需要经过脱水?透明和浸蜡等步骤,能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类,特别是对于那些对有机溶剂或高温耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好?因而较适合于脂肪?神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用于临床诊断?
【实验准备】
1.器材 恒冷箱切片机?
2.耗材 载玻片,羽毛刀片,包埋剂,蔗糖溶液,防脱片剂等?
【实验方法】
1.取材 同石蜡切片制备?
2.固定 用于快速病理诊断时,组织块直接进行冷冻切片,无需此处理,但直接冷冻可能在组织内形成大量的冰晶,会影响实验结果,因此在日常的实验中常须进行固定?固定方法同石蜡切片制备?但固定后的组织切片仍然会有一定的冰晶,为防止冰晶的形成,常采用以下方法?①速冻法:将组织置于低温环境,使组织骤然降温,常用的有干冰?液氮及超低温冰箱等;②利用高渗溶液吸收组织中的水分,常用不同浓度的蔗糖溶液,如将组织放入20%~30%的蔗糖溶液中,置4℃冰箱内,待其沉底后,取出后切片?这样即可大大减少冰晶的形成?
3.包埋 此处所讲的包埋是用水或是恒冷箱切片包埋剂将组织块固定于恒冷箱切片机的样品托上?先在样品托上滴几滴水,凝固后将组织块置于样品托上,再在组织块周边滴加几滴水后,放入恒冷箱切片机内冷冻(恒冷箱切片机平时维持在-10℃左右,实验前将温度调至-20℃)?
4.切片 待组织块变硬后,用刀片修去多余

**篇 基本实验方法
**节 病理大体标本的取材(1)
第二节 组织切片的制作(2)
第三节 HE染色(6)
第四节 组织化学与细胞化学技术(7)
第五节 组织与细胞培养技术(10)
第六节 免疫组织化学染色(14)
第七节 原位杂交技术(15)
第八节 PCR技术(17)
第九节 常用电镜技术及标本制作(18)
第二篇 基本性实验
**章 组织学与胚胎学(22)
实验一 绪论(22)
实验二 上皮组织(25)
实验三 结缔组织(28)
实验四 血液(30)
实验五 软骨和骨(32)
实验六 肌组织(34)
实验七 神经组织(36)
实验八 神经系统(39)
实验九 眼和耳(42)
实验十 循环系统(44)
实验十一 皮肤(47)
实验十二 免疫系统(49)
实验十三 内分泌系统(53)
实验十四 消化管(56)
实验十五 消化腺(59)
实验十六 呼吸系统(62)
实验十七 泌尿系统(64)
实验十八 男性生殖系统(67)
实验十九 女性生殖系统(69)
实验二十 胚胎学发生总论(72)
实验二十一 颜面和四肢的发生(80)
实验二十二 消化系统和呼吸系统的发生(82)
实验二十三 泌尿系统和生殖系统的发生(85)
实验二十四 心血管系统的发生(88)
实验二十五 神经系统和眼?耳的发生(90)
第二章 病理学(93)
实验一 细胞?组织的适应与损伤的修复(93)
实验二 局部血液循环障碍(97)
实验三 炎症(100)
实验四 **(104)
实验五 心血管系统疾病(110)
实验六 呼吸系统疾病(114)
实验七 消化系统疾病(118)
实验八 淋巴造血系统疾病(122)
实验九 泌尿系统疾病(124)
实验十 生殖系统和乳腺疾病(127)
实验十一 内分泌系统疾病(131)
实验十二 神经系统疾病(133)
实验十三 传染病(135)
第三章 细胞遗传学(139)
实验一 人类X染色质标本的制备和观察(139)
实验二 人类Y染色质标本的制备和观察(140)
实验三 人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备(141)
实验四 人类染色体G显带标本的制备和核型分析(143)
实验五 小鼠骨髓染色体标本的制备(144)
实验六 人类姐妹染色单体互换标本的制备与观察(146)
实验七 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的检测(148)
第三篇 综合性实验
实验一 人血涂片的制备及血细胞形态观察(151)
实验二 从甲状腺滤泡的形态结构和功能探讨其与甲状腺肿的关系(153)
实验三 胃的屏障结构与胃溃疡的发生(154)
实验四 血糖浓度的调控**——胰腺(156)
实验五 大?中动脉的结构特点与动脉粥样硬化的发生(158)
实验六 从肺的结构?血液循环特点分析大叶性肺炎呼吸功能改变的特点(160)
实验七 病毒性肝炎—门脉性肝硬化—肝细胞性肝癌的发生和发展(162)
实验八 从胃的解剖和组织结构看胃癌的发生和转移(164)
实验九 家族遗传性结肠多发息肉病组织细胞学综合实验(166)
实验十 颈部淋巴结肿大的病因分析(168)
实验十一 慢性粒细胞性白血病的形态学分析及检测(170)
实验十二 淋巴结结构和淋巴液回流与淋巴结转移癌部位的关系(173)
实验十三 肾组织结构与肾炎的临床病理关系(174)
实验十四 子宫颈癌的发生?发展的形态学观察及病因分析(175)
实验十五 从正常绒毛结构特点看水泡状胎块的病理学特征(177)
实验十六 从肠道组织结构看肠道不同类型溃疡的特点(178)
实验十七 小鼠睾丸染色体标本制备(180)
实验十八 **细胞系染色体标本的制备和观察(182)
第四篇 设计创新性实验
实验一 骨髓间充质干细胞的特性及其在帕金森病**中的应用(184)
实验二 观察脊髓的基本结构和细胞组成(186)
实验三 糖尿病发**展过程中胰岛A细胞量的变化(188)
实验四 有机溶剂苯对生育情况影响的研究(189)
实验五 影响肝脂肪变性的动物实验设计(190)
实验六 从巨噬细胞的趋化运动分析炎症细胞的定向运动(191)
实验七 乳腺癌细胞侵袭能力检测(192)
实验八 免疫组织化学染色初步鉴别非霍奇金淋巴瘤(193)
实验九 利用PAS特殊染色法识别糖尿病肾病中的糖原沉积(194)
实验十 左侧大脑中动脉缺血模型的制备(196)
实验十一 荧光原位杂交技术(198)
实验十二 比较基因组杂交技术(200)
参考文献(204)

《人体显微结构学实验》可供医药院校本科生使用。9787030428363